操作指南
BD采用******技术,从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中分离出BD Matrigel 基底膜基质,其主要成分由层粘连蛋白,Ⅳ型胶原,巢蛋白,硫酸肝素糖蛋白等组成,还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。BD Matrigel基底膜基质在室温条件下,聚合形成具有生物学活性的三维基质,模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能,有利于体外细胞的培养和分化,以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。
BD Matrigel 基底膜基质形成的三维培养基质,可促进上皮细胞、肝细胞、Sertoli细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。同时,Matrigel还能影响乳腺上皮细胞的蛋白表达,支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。高浓度的Matrigel适用于研究体内血管生成和肿瘤细胞迁移及肿瘤模型的建立等。
产品特性
Matrigel基质会有色差变化(淡黄色到深红色),是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的,但是与5%CO2平衡后色差即会减少。冻融后,轻轻摇晃试剂瓶使Matrigel分散均匀。所有操作均需在无菌环境下进行,试剂瓶瓶盖可用70%乙醇擦拭,并自然干燥。应使用预冷的移液器以保证Matrigel呈匀浆状。
细胞可在0.5mm厚度的Matrigel基质层表面生长,也可在1mm厚度的Matrigel三维基质内生长。过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层,可以用于细胞贴壁,但不能用于细胞的分化研究。
注意:可将冻融后的Matrigel分装在多个小管,所有分装均需用预冷的冻存管,迅速冷冻并保存,避免多次冻融。
Matrigel在22-35℃温度环境下快速成胶,因此溶解时在4℃冰上过夜冻融(4度时会随着温度的上升部分成胶)。所有用品在使用前需置于冰浴,必须使用预冷的移液管、吸头及小管操作Matrigel。成胶后的Matrigel可以在4℃24-48小时后重新呈液态。
推荐包被与成胶方法
注意:为了保证Matrigel基质膜的成胶性能与稳定性,稀释浓度不应低于1:3,可用无血清培养基稀释,Matrigel成胶后立即使用。
薄胶成胶方法:
1.冻融后,用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。
2.将需要使用的培养板置于冰上,加入浓度为50μL/cm2生长面积的Matrigel基质。
3.在37℃放置30分钟,即可使用。
厚胶成胶方法:
1.冻融后,用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。
2.将需要使用的培养板置于冰浴,将培养的细胞与Matrigel基质混合,用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为150-200μL/cm2生长面积的Matrigel基质。
3.在37℃放置30分钟,可成胶。可以加入细胞培养的基质,也可使细胞直接生长在胶表面。
薄层包被方法:
1.冻融后,用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。
2.根据使用需要,采用无血清培养基稀释Matrigel基质。根据实验需要确定*包被浓度。
3.将稀释的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中,包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。室温下孵育1小时。
4.去除未结合的Matrigel,用无血清培养基轻轻地冲洗。
BioCoat细胞外基质订购：
货号 名称 规格 优惠价
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用BD细胞回收剂（354253）或离散酶（354235）可降解Matrigel基质，冰浴7小时后回收得到细胞。
BD BioCoat细胞外基质
Material Material description Size
BD BioCoat BD Matrigel基底膜基质
356234 MATRIGEL MATRIX 5ML DI 5ML
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BD BioCoat Dispase分散酶
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BD BioCoat BDTM 细胞回收液
354253 CELL RECOVERY SOLUTION 100ML RT 100ML
BD BioCoatⅠ型胶原
354243 COLLAGEN I HUMAN NATURAL 250UG DI 0.25MG
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BD BioCoatⅡ型胶原
354257 COLLAGEN II BOVINE 5MG DI 5MG
BD BioCoatⅢ型胶原
354244 COLLAGEN III HUMAN NATURAL 250UG DI 0.25MG
BD BioCoatⅣ型胶原
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BD BioCoatⅤ型胶原
354246 COLLAGEN V HUMAN NATURAL 250UG DI 0.25MG
BD BioCoatⅥ型胶原
354261 Collagens Collagen VI, Human 500 μg
BD BioCoat纤维粘连蛋白（FN）
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356008 FIBRONECTIN HUMAN NATURAL 5MG WI 5MG
356009 FIBRONECTIN HU BULK (5X 356008) 5x5MG
BD BioCoat层粘连蛋白(LM)
354232 LAMININ MOUSE NATURAL 1MG DI 1MG
354259 LAMININ ENTACTIN HI CONC MS 10MG DI 10.5MG
354239 LAMININ MOUSE NATURAL 1MG ULTRAPURE DI 1MG
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